丙型肝炎疫苗

丙型肝炎疫苗研究进展丙型肝炎的流行现状1989年，choo等（1）采用差异展示分析法首次获得人丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus，HCV)的cDNA克隆，并证实它是输血传播的非甲非乙型肝炎的主要病原体。1991年，国际病毒分类学会将HCV归为黄病毒科丙型肝炎病毒属。HCV基因组变异较大，分为基因型、亚型、分离株、准种四个层次。世界范围内HCV主要有六个基因型，80多个亚基因型，流行情况与地理和人群分布相关。我国主要为lb，2a，3b型，其中以lb型最多。目前全世界约有4亿HCV感染者，约有70一80%的HCV感染者最终会|导致慢性肝病(2)，随病程延长有一定比例发展为肝硬化和肝细胞癌。在发达国家，丙型肝炎占急性肝炎病例的20%，占慢性持续性肝炎的70%，占晚期肝硬化的40%，占肝细胞癌的60%，已经成为肝脏移植的主要病因，同时也是阻碍肝移植的重要原因。在美国，约400万人通过输血感染HCV，大多数转为慢性，美国的疾病预防控制中心估计该国每年有八千到一万人死于丙型肝炎及相关疾病，预计未来20年内死亡率将增加3倍以上，大大超过艾滋病。1991一1995年，我国一般人群HCV阳性率为2.15%，与血液接触频繁的人群HCV感染率高达50%以上，急性丙型肝炎|转为慢性的机率为乙型肝炎的2一3倍，慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌患者HCV阳性率分别为13.3%、23.8%和13.3一14.5%，急性肝炎患者中合并HCV感染及重叠感染率为62.2%（3）。目前认为丙型肝炎主要通过血源传播，不洁血液制品、反复注射毒品导致的HCV感染占90%，反复使用污染的注射器，己经导致全世界230一470万人感染HCV。其他还有血液透析、生殖、性行为和职业传染等。HCV疫苗开发的必要性丙型肝炎病毒感染后，机体的免疫力下降，HCV会长期存在引起肝细胞内淋巴细胞浸润及肝坏死。更主要是HCV病毒基因高度变异性,可逃逸|机体免疫系统的识别,因此,给HCV感染治疗带来了很大的困难。目前HCV感染治疗方法,局限于疗效欠佳的干扰素和利巴韦林，而且价格昂贵，无法普及。因此对HCV的治疗和预防现在成为全世界关注的重点。寻求一种高效预防和治疗HCV感染的方法是当务之急。而疫苗是预防病毒性疾病感染和传播的有效手段，并可为抗HCV免疫治疗和基因治疗提供新的思路。HCV疫苗的研究概况早期的研究发现HCV具有慢性感染的趋势，而且康复期的患者和黑猩猩容易重复感染。对于这些问题人们现在有新的认识。首先，急性感染中有50%的概率会出现自发的清除，这种病毒的清除是与特异性的|免疫反应相关的（4）。因此通过相应的免疫重新激发这种免疫反应是理想的选择。其次，在人体和黑猩猩中发现能够清除病毒的天然免疫（5,6）。虽然有些患者重复感染后发展为慢性感染，但绝大多数情况下，即使是不同的病毒株，康复期的患者和黑猩猩也不会重复感染，这表明至少产生了部分有效的免疫作用。

1研究表明患者和黑猩猩体内早期诱发的多特异性CD4+Th和CD8+T细胞反应可以有效清除病毒（7）。这两种类型T细胞都可以分泌IFN-γ，这种细胞因子在体外培养的细胞中对HCV复制子具有直接的抗病毒作用，在急性感染期则可以大量减少病毒滴度。|除此之外，利用表面携带HCV包膜蛋白的慢病毒/HCV假型颗粒(HCVPP)进行检测表明，患者体内的抗体不仅只与一种基因型的颗粒反应，而且可以与多种基因型的HCV颗粒反应（8），说明患者体内存在范围较广的交叉中和性抗体。过去几年的研究结果有助于人们了解病毒与宿主之间复杂的斗争。这种病毒并不整合在宿主的染色体上，而是进化出多种机制来逃避宿主的反应（9,10）。HCV抑制NK细胞（11），产生逃逸CTL和中和性抗体的突变体，它可以通过脂蛋白的伪装躲避病毒中和性抗体的结合（12），并在持续感染的情况下，能下调病毒特异的效应T细胞。如果宿主|体内能尽早诱导产生病毒特异且广谱(针对准种)的CD4+Th和CD8+T细胞反应，产生天然免疫的NK细胞，以及病毒中和性抗体，就会实现病毒的清除。在二十年前，人们对HCV的疫苗不抱有太大的希望，因为HCV不仅在体外无法培养，而且具有遗传异质性，由于HCV的RNA聚合酶缺乏校正机制，使病毒能迅速突变以适应环境，逃逸宿主的免疫系统。这样就给疫苗的研究带来许多的困难。直到最近，人们才刚刚建立了HCV的体外细胞培养模型（13-15），因此还未能得到传统的灭活或减毒病毒疫苗。人们开始尝试亚单位疫苗的研究。亚单位疫苗范围很广，包括由病原体中纯化|的抗原；携带编码抗原基因的质粒DNA;利用完整的重组病毒作为载体；以及化学合成的短肽。与传统的疫苗相比，亚单位疫苗具有以下优点：(l)去除了病原成分的疫苗不具有传染性：(2)根据特定目的设计的疫苗，不仅可以去除毒素，而且可以诱导重要的免疫反应清除感染：(3)可以应用于无法进行细胞培养的HCV疫苗研制中。科学家们为了研制有效的HCV疫苗，进行了各种尝试，采用了各种策略例如：重组病毒疫苗、DNA疫苗、融合蛋白疫苗、口服疫苗等。研究的热点包括包膜蛋白El/E2、核心蛋白C到非结构蛋白NS3以及NS5。但是目前暂时还没有一种成功的HCV疫|苗问世。目前正在研制的HCV疫苗主要有两大类：重组蛋白疫苗和核酸疫苗。另外还有一些新型的HCV疫苗如病毒样颗粒疫苗、细胞表位疫苗等。重组蛋白疫苗在小鼠,猕猴,大猩猩体内进行候选蛋白疫苗的评价均有报道。最先被选择的抗原是HCV编码的糖蛋白。动物细胞表达的两种蛋白El和E2形成了无二硫键连接的糖蛋白gPE1-gPE2异二聚体。与水/油构成的佐剂混匀后，免疫黑猩猩，可以诱导抗包膜蛋白抗体反应和Th细胞反应（16）。早期的实验表明如果用与E1、E2同源的病毒攻击，抗体滴度最高的黑猩猩可以得到完全的保护反应。这种保护反应与高滴度的E2抗体直|接相关，该抗体能够阻止E2与CD81的结合。而且，尽管抗体水平较低的黑猩猩感染了HCV，但大多数阻断了急性感染，只有少数发展为慢性感染。

2由HCV-1克隆而来的抗原是否能保护