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第2课微生物的培养与应用
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3考点一 微生物的实验室培养【核心知识·突破】1.培养基：(1)概念：人们按照微生物对_________的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。营养物质
4(2)种类：液体培养基和_____培养基，二者的区别是是否添加_______。(3)营养成分。①主要营养物质：_____、_____、水和无机盐。②其他条件：pH、_________和氧气。固体凝固剂碳源氮源特殊营养
52.无菌技术：(1)目的：获得_____________。(2)关键：防止_________的入侵。(3)常用方法：_____和_____。纯净的培养物外来杂菌灭菌消毒|n(4)无菌技术的主要方法及适用对象(连一连)：
63.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：(1)计算：依据配方比例，计算配制100mL的培养基时，_________的用量。(2)称量：准确地称取_________。各种成分各种成分
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8(5)倒平板：待培养基冷却至___℃左右时，在________________倒平板。50酒精灯火焰附近
94.纯化大肠杆菌：(1)菌落：由_________繁殖而来的肉眼可见的_______群体。一个细胞子细胞
10(2)主要方法及纯化原理：主要方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理通过接种环在琼脂固体培养基的表面_________操作，将聚集的菌种|逐步稀释分散到培养基表面将菌液进行一系列的_________，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞连续划线梯度稀释
11主要方法平板划线法稀释涂布平板法主要步骤_________操作系列稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环_______平板示意图平板划线涂布器
12(3)平板划线操作中灼烧接种环的目的：灼烧时间灼烧目的第一次划线前杀死接种环上原有的微生物，防止_________污染培养基第二次及以后每次划线前杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于_______________最后一次划线后杀死接种环上残存的菌种，避免细菌_________和_|__________外来杂菌上次划线的末端污染环境感染操作者
13(4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析：
14①获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？提示：获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法，获得图B效果的接种方法为平板划线法。
15②某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示：最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。
16③接种操作为什么一定要在火焰附近进行？提示：火焰附近存在无菌区|域。
175.菌种的保藏方法：主要方法临时保藏法甘油管藏法保藏对象频繁使用的菌种_________的菌种方法步骤先接种到试管的_________培养基上培养，然后放入4℃的冰箱中转入灭菌后的_____中，混匀后放在-20℃冷冻箱中保存长期保藏固体斜面甘油
186.【教材易漏知识】选修1P18“旁栏小资料”：微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？
19提示：不是。微生物的接种方法还包括斜面接种、穿刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
20【微点警示】微生物培养的“三点提醒”(1)培养基中营养物质的确定方法。①自养型微生物所需的主要营养物|质是无机物，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。
21②异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。
22(2)选择无菌技术的原则。①考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。
23(3)纯化大肠杆菌的两种方法的异同。①相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。②不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。
24【秒判正误】1.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零|后，开启锅盖。()分析：高压灭菌加热结束后，让其自然冷却，当压力表的压力降到零时打开排气阀。×
252.在配制培养基时，一般微生物除满足营养需求外，还应该考虑pH、氧气及特殊营养物质的要求。()分析：一般微生物需要一定的营养、氧气、pH及特殊物质(如添加维生素)，但培养厌氧微生物时，培养基不能与氧气接触。√
263.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。()分析：倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖。×
274.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。()分析：灼烧接种环之后，要冷却后|才能挑取菌落，以免温度太高杀死菌种。×
285.从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿要放在光照培养箱中培养。()分析：接种后的培养皿应放在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件。×
296.筛选产乳糖酶的微生物时，宜用乳糖作为培养基中的唯一碳源。()分析：在以乳糖为唯一碳源的培养基上，只有能产生乳糖酶而利用乳糖的微生物才能生存。√
30【命题案例·研析】【典例】(2018·全国卷Ⅰ)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液，在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：
31(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养|基中应加入链霉素以抑制________的生长，加入了链霉素的培养基属于_______培养基。
32(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有____________________________(答出两点即可)，氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有________________________
