液质联用分析多肽实验条件的探索 应用化学专业

液质联用分析多肽实验条件的探索摘要高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术是近几年来发展起来的一项新的分离分析技术。它将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供结构信息的质谱法结合起来，成为一种重要的现代分离分析技术。液质联用为生产和科研提供了许多有价值的数据，解决了许多在此之前难以解决的分析问题。本文主要探索液质联用的条件，并运用LC-MS仪对多肽进行了产品性质认定和分析杂质性质，希望能建立一套完整的液质联用体系。关键词：高效液相色谱-质谱，联用的条件，产品性质认定，杂质分析

1Abst|ractHigh-performanceliquidchromatography-massspectrometry(HPLC-MS)inconjunctionwithtechnologyinrecentyearsdevelopedanewseparationanalysistechniques.Itaverywiderangeofapplicationsofseparationmethods-liquidchromatographywithsensitive,proprietary,canprovideinf|ormationonmolecularweightandstructureofthecombinationofmassspectrometryhasbecomeanimportantseparationofmodernanalysistechniques.HPLC-MSprovidelotsofvaluabledataforproductionandscientificresearch, andsolvemanypreviously difficultproblems.Thispapermainlyexplo|res theLC-MS conditions, andtheuseofLC-ESI-MS instrument and analysisofimpurities onthe propertiesoftheproduct todeterminethenatureof thepolypeptide,hopetoestablish acompletesetof liquidchromatography-massspectrometry system.KeyWords：HPLC-MS,incombinationwi|th the condition, natureoftheproduct identification, impurityanalysis目录摘要IAbstractII第一章前言III第二章实验部分62.1实验目的62.2实验原理62.3实验仪器与试剂82.4实验步骤82.4.1管道连接82.4.2流动性制备8

22.4.3一般参数配置82.4.4实验步骤9第三章结果与讨论103.1第一个实验103.2第二个实验123.3第三个实验15第四章结论与展望24参考文献26致谢27第一章前言蛋白质是生物体中含量最高|、功能最重要的一类生物大分子。它存在于所有生物细胞中，约占细胞干质量的50%以上，它在生命科学中所占重要位置可想而知。LinusPauling[1]于1937年阐述蛋白质的重要性时曾经说过：“生命的奥秘就在于揭示蛋白分子是如何从无序基质形成的，又如何依据其自身映像复制新的蛋白分子的。”用今天的标准来看，当时对蛋白质的功能和结构还知之甚少。当然，现在人们已经了解蛋白质在生物学中数不胜数的功能，而且还获得了一些重要蛋白质的高分辨结构，人们的知识范围正以更快的速度不断扩展着。质谱法在这方面愈来愈显出威力，也愈来愈引|起人们的重视。质谱能够定性、定量分析有机小分子、肽、蛋白质以及核酸等各种分子，是一种强有力的分析技术。质谱技术的特点是快速、准确和灵敏度高。从J.J.Thomson

3制成第一台质谱仪到现在为止已有90年历史了，早期的质谱仪主要是用来进行同位数测定和无机元素分析，在20世纪40年代之后就开始用于分析有机物，而60年代出现的气相色谱-质谱联用仪使得质谱仪的应用领域大大扩展起来。开始成为有机物分析的重要仪器。伴随着计算机的快速发展，这又使质谱分析法发生了飞跃的变化，使其技术更加成熟，应用更加方便。80年代以后又出|现了一些新的质谱技术，如：1)电喷雾电离质谱（electrosprayionizationmassspectrometry，ESI-MS）2)基质辅助激光解吸电离质谱（matrixassistedlaserdesorptionionizationmassspectrometry，MALDI-MS）3)快原子轰击质谱(fastatombombardmentmassspectrometry，FAB-MS)4)离子喷雾电离质谱（ionsprayionizationmassspectrometry，ISI-MS）5)|大气压电离质谱（atmosphericpressureionizationmassspectrometry，API-MS）以及随之而来的较成熟的液相色谱-质谱联用仪、感应耦合等离子体质谱仪、傅里叶变换质谱仪等。这些新产生的电离技术与新的质谱仪器使质谱分析又取得了较大的进展[2]。在以上的电离技术中，近年来研究的最多的是前面三种，他们在蛋白质和多肽方面的应用上较为广泛。应用质谱研究肽和蛋白质刚有几十年的历史，研究范围从作为蛋白质最基本组成部分的氨基酸，到生物大分子的多肽和蛋白质，从分子质量范围的不断扩展可以衡量|质谱的飞速发展。1981年，Barber[3]等首先提出用FAB质谱测定肽的分子量，他们采用双聚焦质谱仪，以甘油为基质，分析一个十一肽。但是FAB质谱分析只适用于分子量小于6000Da的肽或小蛋白质，如果分子量再大的肽用此技术分析就十分困难。所以FAB质谱只适用于分析化学降解或酶水解的蛋白质以及人工合成的寡肽。到了80年代左右，随着快原子轰击（FAB）、电喷雾（ESI）和